黃芩解毒散的抑菌試驗

摘 要:測定了黃芩解毒散對豬大腸桿菌、雞大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌和仔豬紅痢魏氏梭菌4種細菌的體外抑菌效果和最小抑菌濃度。結果表明,黃芩解毒散4種細菌高度敏感,最小抑菌濃度為15.0 mg /mL。

 

大腸桿菌、沙門氏菌和魏氏梭菌等引起畜禽腹瀉的主要病 [1,2]。本試驗測定了黃芩解毒散對豬大腸桿菌、雞大腸桿菌、雞沙門氏菌豬魏氏梭菌體外抑菌作用和最小抑菌濃度(MIC ),旨在探討黃芩解毒散防治畜禽腹瀉的機理。

1  材料與方法

1.1 培養基

普通營養肉湯、普通營養瓊脂和厭氧肉肝湯參考文獻[3]制備;厭氧增菌培養基,購自杭州天和微生物制劑有限公司。4 ℃保存備用。

1.2 中藥及準

黃芩解毒散浸膏,每毫升含生藥2.404 g,由南京知新醫藥研發有限公司提供。白頭翁散,獸藥字(2006100325053,揚中牧樂藥業有限公司,市售。用去離子水煎煮2次,合并煎液,紗布過濾,濾液加熱濃縮至每毫升含生藥1 g,100 ℃滅菌30 min,4 ℃保存備用。

1.3 受試菌株

豬大腸桿菌,CVCC1521;雞大腸桿菌O78,CMCC44439;雞沙門氏菌,CVCC533;豬魏氏梭菌,CVCC61, 中國獸藥監察所。

1.4 抑菌效果測定

 豬大腸桿菌、雞大腸桿菌雞沙門氏菌分別接種于普通營養肉湯,豬魏氏梭菌接種于厭氧肉肝湯,37 ℃培養豬魏氏梭菌厭氧培養)24 h復壯。按一定倍數稀釋后(豬大腸桿菌1000倍、雞大腸桿菌500倍、雞沙門氏菌500倍、豬魏氏梭菌200倍,預試驗測定),吸取150 μL于普通營養瓊脂平板內,用L形涂布棒涂勻。 用直徑6 mm的打孔器在平板上打孔,酒精燈加熱封底,孔內注滿藥液,每種藥液重復9孔,對照孔注滿生理鹽水。37 ℃培養豬魏氏梭菌厭氧培養)24 h后測量抑菌圈直徑[3]。根據文獻[4]介紹的標準判定各藥的抑菌作用:抑菌圈直徑小于10 mm為低度敏感,1015 mm為中度敏感,15 mm以上為高度敏感。

1.5 最小抑菌濃度測定

 用瓊脂稀釋法[5]。先將藥液用營養肉湯豬魏氏梭菌用厭氧肉肝湯)倍比稀釋成10種不同濃度黃芩解毒散,24044.7 mg/mL;白頭翁散,10001.9 mg/mL。然后分別按1:9的比例加入溶化的營養瓊脂中,100 ℃滅菌30 min,待溫度降到4050 ℃時倒入滅菌的平皿中。平板凝固后放于37 ℃的溫箱中干燥1 h,用劃線法接種各細菌種,37 ℃培養豬魏氏梭菌厭氧培養)24 h后觀察平板上的菌落數。同時設不接種任何細菌作陰性對照和陽性對照,即不加藥液但接種細菌的平板,同種處理重復4。無菌落生長的最低藥物濃度為最低抑菌濃度(MIC)。

1.5 數據處理

t檢驗比較黃芩解毒散和白頭翁散對各細菌抑制效果的差異。

2  結果與分析

2.1 抑菌效果

黃芩解毒散對4種細菌的平均抑菌圈直徑15.318.8 mm之間,屬高度敏感。對雞大腸桿菌、雞沙門氏菌和仔豬魏氏梭菌的抑菌圈直徑顯著大于白頭翁散(P<0.05)。白頭翁散4種細菌的平均抑菌圈直徑6.814.0 mm之間,除對豬大腸桿菌中度敏感外,對其它3種細菌作用不明顯(表1。

1  中藥抑菌圈直徑(mm,n9

 

豬大腸桿菌

雞大腸桿菌

雞沙門氏菌

仔豬魏氏梭菌

黃芩解毒散

17.1±0.8

15.3±0.7a

15.4±0.3a

18.8±0.6a

白頭翁散

14.0±0.7

9.5±0.9b

7.2±0.4b

6.8±0.6b

生理鹽水

注:同列數據上標字母不同者差異顯著(P<0.05)。

 

2.3 最小抑菌濃度(MIC)

黃芩解毒散對豬大腸桿菌、雞大腸桿菌、雞沙門氏菌和豬魏氏梭菌的MIC15.0 mg /mL。白頭翁散對豬大腸桿菌雞大腸桿菌的MIC分別為 60.1mg/mL 120.2 mg/mL,對雞沙門氏菌和豬魏氏梭菌的MIC未測出。

3  討論

試驗結果表明,黃芩解毒散對4種供試菌株有較強的抑制作用,屬高度敏感?赡其以清熱解毒藥為主有關,方中黃芩[6]、地錦草[7]、玄參[8]、女貞子[9]、金櫻子[10]老鸛草[11],對大腸桿菌、痢疾桿菌和葡萄球菌等多種細菌均有較好的抑制效果。

防治畜禽腹瀉的關鍵在于 養重于防,防重于治。一旦發病用藥時應選擇對菌株進行藥敏實驗,再選擇對菌株敏感的藥物。本試驗中黃芩解毒散對各受試菌株均有較強抑菌效果,可能是該藥防治畜禽腹瀉機制之一。

4 結論

黃芩解毒散對豬大腸桿菌、仔豬魏氏梭菌、雞大腸桿菌和雞沙門氏菌高度敏感,MIC15.0 mg /mL。

參考文獻:

[1] 華升,梅書棋,曾德芳,豬場仔豬腹瀉的病因及綜合防制[J]中國畜牧獸醫, 2007, 34(3): 115117

[2] 惲時鋒,潘震寰,鄭明球雞大腸桿菌病研究進展[J]畜牧與獸醫, 1998, 30(6): 277280

[3] 俞樹榮微生物學和微生物學檢驗[M]北京人民衛生出版社, 2002. 169175

[3] 謝仲權,牛樹琦,劉鳳華天然物中草藥飼料添加劑研究方法[M]北京:中國農業科技出版社,2001,96

[4] 于文濤,關云濤,樸忠洙,HVT國內株的分離鑒定[J]中國預防獸醫學報, 2002, 24(1): 3536

[5] 陳奇中藥藥理研究方法學[M]. 北京人民衛生出版社, 2006, 262267

[6] 商亞珍,蘇丙凡黃芩根及其莖葉成分的藥理學研究進展[J].承德醫學院學報,2005, 222):153155

[7] 朱英,孫腹娣,毛樺.地錦草總黃酮的超聲提取工藝研究[J].中國中醫藥科技,2006, 11 6):413415

[8] 師怡,許暉,闕慧卿,等.玄參化學成分的藥理作用和分析方法[J].海峽藥學,2006,18):5861

[9] 秦紅霖,高月.女貞子化學成分及藥理研究進展[J].中藥新藥與臨床藥理,2007,(1):8485

[10] 鄒洪濤,陳世軍,楊艷.金櫻子開發利用研究進展[J].林業實用技術,200,(3):2931

[11] 范紅艷,郭建鵬,于海玲.老鸛草提取物對消炎痛型及利血平型胃潰瘍小鼠潰瘍指數的影響[J].延邊大學醫學報,2006,124):256259


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